مراحل خاص برای استخراج کلروفیل از طریق تکه تکه شدن سلول با استفاده از سنگ شکن سلولی اولتراسونیک

سنگ شکن سلولی اولتراسونیک از اثر پراکندگی فراصوت در مایع برای ایجاد حفره استفاده می کند و در نتیجه ذرات جامد یا بافت های سلولی را در مایع می شکند.
توسعه صنعت بیولوژیکی الزامات آزمایش با استفاده از پودر کننده های سلول اولتراسونیک مانند اندازه گیری و کنترل دمای نمونه، بهبود سطح هوشمندی نمونه های خنک کننده در دمای پایین و کل دستگاه و غیره را افزایش داده است.
مراحل خاص استخراج کلروفیل از طریق خرد کردن سلول اولتراسونیک با استفاده از سنگ شکن سلولی اولتراسونیک:
1. نمونه آب را سانتریفیوژ یا فیلتر کنید و یک غشای فیلتر فیبر استات روی فیلتر مکش نصب کنید. حجم کمی از نمونه آب را برای فیلتر کردن بریزید و فشار منفی در طول فیلتراسیون نباید خیلی زیاد باشد (حدود 50 کیلو پاسکال). پس از کشیدن نمونه آب، کشیدن را برای 1-2 دقیقه ادامه دهید تا رطوبت غشای فیلتر کاهش یابد. اگر ذخیره کوتاه مدت برای 1-2 روز مورد نیاز است، می توان آن را در یخچال معمولی برای انجماد نگهداری کرد. در صورت نیاز به نگهداری طولانی مدت (30 روز)، باید در یخچال با دمای پایین ({8}} درجه) نگهداری شود.
2. غشای فیلتر حاوی فیتوپلانکتون را خارج کرده و در دمای پایین به مدت 6-8 ساعت در یخچال خشک کنید. آن را با قیچی به قطعات کوچک برش دهید و در یک لوله سانتریفیوژ 5 یا 10 میلی لیتری قرار دهید. 3-4 میلی لیتر استون 90% اضافه کنید تا قطعات زیر سطح مایع غوطه ور شوند. قطعات را در ظرف اولتراسونیک قرار دهید و از امواج اولتراسونیک برای شکستن سلول های نمونه استفاده کنید. (مقایسه آزمایش ها در زمان ها و فرکانس های مختلف برای تسهیل شناسایی * زمان و فرکانس تکه تکه شدن برای روش های یکپارچه).
3. نمونه در معرض تکه تکه شدن سلول را با استفاده از سونوگرافی با استفاده از سانتریفیوژ (3000-4000r/min) به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را در یک فلاسک حجمی 5 یا 10 میلی لیتری بریزید. با 90 درصد استون به 5 میلی لیتر یا 10 میلی لیتر رقیق شده و خوب تکان دهید.
4. مایع رویی را روی یک اسپکتروفتومتر قرار دهید و از یک ظرف رنگ سنجی مسیر نوری 1 سانتی متری برای خواندن مقادیر جذب در طول موج های 750 نانومتر، 663 نانومتر، 645 نانومتر و 630 نانومتر استفاده کنید. برای تصحیح جذب نمونه از استون 90% به عنوان اندازه گیری جذب خالی استفاده کنید.